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铜藻中多不饱和脂肪酸的提取和纯化方法研究

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  • 【题名】:铜藻中多不饱和脂肪酸的提取和纯化方法研究
  • 【年度】:2020
  • 【作者】:夏梦露
  • 【关键词】:铜藻  多不饱和脂肪酸  超声波辅助提取  液质联用  高速逆流色谱
  • 【摘要】:铜藻(Sargassum horneri)含有多糖、膳食纤维、植物甾醇、多不饱和脂肪酸等多种活性成分。目前国内外对铜藻的研究主要集中在多糖、膳食纤维等大分子活性物质,而对于多不饱和脂肪酸这类低极性小分子化合物的研究则相对较少。研究表明多不饱和脂肪酸是人体所需的营养物质,具有降血脂、降血糖、延缓衰老等生理功能。然而铜藻中多不饱和脂肪酸含量较低,结构及理化性质相似,采用传统方法对其分离提纯费时费力。因此,本论文采用超声波辅助提取、液质联用分析以及高速逆流色谱等现代分离分析手段,探索和建立铜藻中多不饱和脂肪酸的高效提取、分析与分离方法。主要研究内容及结果如下:1、研究建立了超声波辅助提取铜藻中多不饱和脂肪酸的方法。考察了不同提取溶剂、料液比、超声时间和超声功率4个因素对提取铜藻多不饱和脂肪酸的影响。在单因素实验的基础上,以代表性物质花生四烯酸的峰面积为参考指标,采用响应面分析法优化出超声波辅助提取的最佳工艺条件。优化得到铜藻多不饱和脂肪酸的最佳提取工艺为:液料比为21 mL/g,超声时间为21 min,超声功率为500 W。此条件下得到多不饱和脂肪酸的峰面积与预测值仅差1.2%,表明该响应面模型及其结果准确、可信。2、研究建立了液质联用快速定性及定量分析铜藻中不饱和脂肪酸的方法。采用高效液相色谱-高分辨飞行时间质谱快速检测了铜藻脂肪酸提取物,分析鉴定了8个脂肪酸类化合物,有效避免了皂化、甲酯衍生化等预处理步骤。采用高效液相色谱-串联四级杆质谱对铜藻不饱和脂肪酸提取物中的α-亚麻酸和花生四烯酸进行定量分析,并对所建立的分析方法进行了验证。α-亚麻酸在0.5~25μg/mL范围内线性关系良好;花生四烯酸在0.1~25μg/mL范围内线性关系良好;两个化合物的回收率均在90%以上且RSD值小于6%;铜藻不饱和脂肪酸提取物中的α-亚麻酸含量为0.82%,花生四烯酸含量为2.45%。实验结果表明高效液相色谱-串联质谱法灵敏度高、回收率和精密度良好,能够准确定量分析铜藻不饱和脂肪酸提取物中的α-亚麻酸和花生四烯酸。3、采用高速逆流色谱结合半制备型液相色谱法分离纯化了铜藻中的α-亚麻酸和花生四烯酸单体。通过测定分配系数,确定正己烷-甲醇-水(0.1%TFA)(10:6.5:3.5,v/v/v)作为逆流色谱的两相溶剂体系。系统考察了转速、流动相流速对色谱固定相保留率的影响。通过高速逆流色谱分离铜藻不饱和脂肪酸提取物中的α-亚麻酸和花生四烯酸,单次进样量可达500 mg。经HPLC检测,分离得到的α-亚麻酸和花生四烯酸纯度分别为72.7%和80.8%。进一步通过半制备型液相色谱对目标组分精制纯化,α-亚麻酸和花生四烯酸精制后的纯度分别为91.5%和96.6%。实验结果表明高速逆流色谱结合半制备型液相色谱法是一种高效、经济的制备色谱方法,非常适用于铜藻不饱和脂肪酸粗提物的分离和纯化。
  • 【分类号】:TS201.4;O657
  • 【学位名称】:硕士
  • 【导师名称】:卢延斌
  • 【学位授予单位】:浙江工商大学
  • 【学位年度】:2020
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